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玻璃層析柱的使用方法

發(fā)布時間： 2022-06-18　　點擊次數(shù)： 3238次

　　玻璃層析柱適用于分子篩、離子交換、凝膠滲透與親和層析。隨著液相層析法進入血液制品生產，利用層析法，可純化血漿中多種蛋白，例如白蛋白等等。下面讓我們一起來了解一下玻璃層析柱的使用方法吧。
　　先用洗液洗凈層析柱，用水清洗后再用蒸餾水清洗、干燥，在層析柱底鋪一層玻璃纖維或脫脂棉，而后將吸附劑氧化鋁裝入柱內。
　　裝入的方法分濕法和干法兩種，濕法是將備用的溶劑轉入管內，將氧化鋁和溶劑調成漿狀慢慢地倒入管中，此時應將管的下端活塞打開使溶劑慢慢流出，吸附劑即漸漸沉子管底，加完氧化鋁后繼續(xù)使溶液流出，直至氧化鋁的沉降不再變動;
　　干法是在管上端放一漏斗，使氧化鋁均勻地經(jīng)漏斗成一細流慢慢裝入管內，中間不應間斷，時時輕輕敲打玻璃管使填轉均勻，全部加入后再加入溶劑使氧化鋁全部潤濕。
　　一般以濕法裝柱為宜，因為容易把夾雜在氧化鉛中的氣泡趕出，無論采用那一種方法裝柱，必須注意以下事項。
　　①不能使氧化鋁中有裂縫和氣泡，否則影響分離效果。
　　②氧化鋁的高度一般為玻璃管高度的3/4。
　　③裝好的氧化鋁柱上面覆蓋一層濾紙、玻璃纖維或脫脂棉以保持氧化鋁上端頂部平整，不受流入溶劑的干擾。
　　④氧化鋁柱上面要保持約0. 5 ~ lcm高的溶劑層，勿使氧化鋁露出溶劑的液面，上面裝一分液漏斗。
　　待柱裝妥后，然后加樣，把將要分離的樣品溶在一定體積的溶劑中配成樣品溶液，將氧化鋁上的多余溶劑排出，直到柱內液面到達氧化鋁的表面時，停止排放。沿管壁加入樣品溶液，注意不讓溶劑把氧化鋁沖松浮起，樣品溶液加畢后，開放活塞使液體漸漸放出至溶劑液面和氧化鋁表面齊平(勿使氧化鋁表面干燥)。
　　樣品吸附在氧化鋁柱上后，用合適的溶劑進行洗脫，樣品中各組分在氧化鋁上經(jīng)過吸附、溶解、再吸附、再溶解······,規(guī)律地自上而下移動，使樣品分成若干色圈(或稱色環(huán))，達到分離、提純目的。
　　必須注意層析柱的直徑愈粗形成的色圈愈狹小，色帶相互之間排列愈緊，對分辨和分離難度要大一些，但分離時間較短，速度較快，柱細長對色帶相互之間距離增大容易分開，但分離時間長，對裝填吸附劑操作不方便，通常選擇柱的直徑與長度的比例在1：30或1：25及1：20的范圍比較合適。

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